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　　乙酰辅酶A羧化酶调控上皮性卵巢癌耐药、增殖及转移相关通路机制研究.pdf

　　研究目的通过慢病毒干扰卵巢上皮肿瘤细胞中ACC的表达，以及通过TOFA调节ACC的活性，观察卵巢癌耐药性、侵袭性的变化，同时检测PI3K/AKT通路的表达水平，找出二者的关系，揭示卵巢上皮性肿瘤中ACC表达量/活性与肿瘤耐药和侵袭的关系，为临床开发卵巢癌的治疗药物提供新的思路。研究方法1．通过PCR及WESTERNBLOT技术验证ACC在A2780及A2780泰素耐药株A2780T中的本底表达。2．通过生物信息学方法，检索干扰ACC基因表达的最优序列3．构建ACC真核表达质粒，脂质体转染卵巢上皮癌细胞A2780，摸索最佳干扰序列。4化学合成载有ACCSIRNA的慢病毒包装，并导入A2780TAXOL细胞5应用MTT和流式细胞术（FCM），分别检测细胞在高表达ACC和不表达ACC两种情况下的增殖、细胞周期差异6采用WESTERNBLOT方法检测A2780T细胞在TOFA处理下AAC、MTOR、AKT磷酸化及非磷酸化状态的表达,以及细胞在TOFA处理后与对照组的耐药性差异。研究结果1在A2780及A2780泰素耐药株中，检测到ACC的表达量差异，A2780泰素耐药株中ACC表达显著高于A2780野生型。2构建成功装载有干扰ACCSIRNA的慢病毒，并成功转入A2780T细胞，建立了A2780TSIACC的新的低表达ACC的细胞株及其对照组。3研究验证了TOFA是通过通过磷酸化ACC导致其失活，从而导致细胞的耐药性降低及细胞周期停滞。TOFA不直接引起细胞凋亡，而需要与化疗药物协同作用。4ACC表达的干扰可以引起A2780T细胞耐药性的显著降低。同时，通过TOFA磷酸化ACC导致其失活后，亦可以达到同样的效果。5在TOFA处理的细胞中，通过WESTERNBLOT检测PI3K/AKT活通路性相关的PMTOR及PAKT表达均明显下降，提示ACC的磷酸化可能通过影响PI3K/AKT通路的活性从而影响细胞的耐药性。研究结论1细胞内ACC的表达缺失及活性的抑制均可以导致细胞周期停滞、细胞对化疗药物的耐药性的降低。2TOFA通过磷酸化ACC从而影响其活性。TOFA对细胞无直接杀伤作用，但可以协同化疗药物杀伤肿瘤细胞，对正常细胞没有明显影响，是一种潜在的卵巢癌的治疗药物3ACC可能是通过其磷酸化而影响PI3K/AKT通路的活性来调节细胞的耐药性和侵袭性的。

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